Plasmide Double Nickase (h) NG2: sc-400699-NIC

CSPG4 code le protéoglycane transmembranaire NG2 (chondroïtine sulfate), un co‑récepteur multifonctionnel qui module les interactions cellule–matrice et la signalisation des facteurs de croissance. NG2 influence le remodelage du cytosquelette, l’adhérence et la migration via des voies associées à la signalisation des intégrines/FAK, de PDGF et de MAPK/ERK, favorisant des phénotypes cellulaires prolifératifs et invasifs. Dans les tissus humains, l’expression de CSPG4/NG2 est associée à des états de type progéniteur ainsi qu’à des programmes périvasculaires ou stromaux, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie tumorale, du remodelage angiogénique et des mécanismes de résistance aux thérapies. Une signalisation NG2 dérégulée et l’engagement avec la matrice extracellulaire sont donc pertinents pour les recherches sur la progression maligne, la dynamique des niches vasculaires et la plasticité induite par le microenvironnement.

NG2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CSPG4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CSPG4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CSPG4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CSPG4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.