Plasmide CRISPR/Cas9 KO Neutrophil Elastase (h): sc-400677

Présentation

ELANE code pour l’élastase des neutrophiles, une protéase à sérine associée aux granules, libérée lors de la dégranulation des neutrophiles et de la formation de NET afin de cliver des protéines de la matrice extracellulaire et d’inactiver des facteurs de virulence microbiens. Son activité s’intègre aux signaux de l’immunité innée, à l’équilibre protéase–antiprotéase et aux cascades inflammatoires qui façonnent le recrutement leucocytaire et le remodelage tissulaire. Un dysfonctionnement de l’élastase des neutrophiles contribue à une protéolyse aberrante ainsi qu’à un stress oxydatif/inflammatoire dans les microenvironnements des voies aériennes et vasculaires, et des variants d’ELANE sont associés à des phénotypes de neutropénie congénitale avec altération de la maturation myéloïde. Ainsi, ELANE est largement étudié en biologie des neutrophiles, dans les interactions hôte–pathogène et dans les mécanismes reliant la granulopoïèse aux lésions tissulaires inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Neutrophil Elastase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ELANE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ELANE, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ELANE à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Neutrophil Elastase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ELANE pour l'étude de la signalisation de Neutrophil Elastase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ELANE essentiels à la fonction de Neutrophil Elastase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ELANE pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Neutrophil Elastase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Neutrophil Elastase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ELANE. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Neutrophil Elastase plasmide HDR (h) et le Neutrophil Elastase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ELANE pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ELANE définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.