Neuralized-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407560-NIC

NEURL2はNeuralized-2をコードしており、Neuralized-2はRING型のE3ユビキチンリガーゼとして、特定の膜タンパク質やシグナル伝達タンパク質のユビキチン化と分解（ターンオーバー）を促進し、受容体のトラフィッキングやシグナルの持続時間を制御します。ヒト細胞では、Neuralized-2はNotch経路構成因子の制御や、ユビキチン・プロテアソーム系による細胞運命決定、極性、分化プログラムのより広範な制御に関与すると報告されています。これらの機構を通じて、NEURL2の活性は上皮の恒常性や、発生シグナル下流における状況依存的な転写出力に影響し得ます。NEURL2の発現変動やユビキチン介在性シグナルの破綻は、文献上、がん関連の表現型や経路の異常制御と関連づけられており、シグナル伝達機構や細胞状態遷移の解明研究における重要性が示唆されています。

Neuralized-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NEURL2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NEURL2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NEURL2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NEURL2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。