Partículas Lentivirales de Activación (h) NEDD8: sc-417924-LAC

NEDD8 codifica la proteína 8 expresada en células precursoras neurales y reprimida durante el desarrollo, un modificador tipo ubiquitina que se conjuga a dianas mediante la cascada de neddilación (E1 NAE1/UBA3, E2 UBE2M/UBE2F y ligasas E3). La conjugación de NEDD8 es un regulador central de las ligasas de ubiquitina cullin-RING, ya que favorece el recambio dependiente de ubiquitina de proteínas que controlan la progresión del ciclo celular, la replicación del ADN, las respuestas al estrés y la transducción de señales. Al ajustar la proteostasis y el control de los puntos de control, NEDD8 influye en vías vinculadas con la estabilidad del genoma y la señalización inflamatoria. La neddilación desregulada se ha asociado con programas de proliferación alterados y con redes anómalas de degradación proteica observadas en múltiples estados celulares relevantes para enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral NEDD8 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NEDD8 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NEDD8 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NEDD8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NEDD8. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NEDD8 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.