Plasmide Double Nickase (h) NEDD4-L: sc-403647-NIC

NEDD4L code NEDD4-L, une ligase E3 de l’ubiquitine à domaine HECT qui régule le renouvellement des protéines et l’abondance des protéines membranaires en catalysant la conjugaison de l’ubiquitine à des substrats spécifiques. C’est un modulateur clé du trafic du canal sodique épithélial (ENaC) et de l’homéostasie ionique, et il intervient également dans les voies de signalisation de croissance et de stress via un contrôle ubiquitine‑dépendant de composants de ces voies. NEDD4-L a été impliquée dans la régulation de la signalisation TGF-β/SMAD, des sorties de la voie Wnt, ainsi que des réponses cellulaires qui façonnent les programmes de prolifération et de différenciation. Une dérégulation de l’expression ou de l’activité de NEDD4L est associée à des altérations de la physiologie du transport épithélial et a été rapportée dans des études de biologie du cancer et de traits cardiométaboliques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur la signalisation par l’ubiquitine.

NEDD4-L Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NEDD4L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NEDD4L. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NEDD4L. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NEDD4L.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.