NEDD4-L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429949

Descripción general

Nedd4l codifica NEDD4‑L, una ligasa E3 de ubiquitina con dominio HECT que regula el recambio proteico al catalizar la ubiquitinación de proteínas de membrana y de señalización, incluidos canales iónicos y transportadores como ENaC. Mediante la modulación de la endocitosis dependiente de ubiquitina y de la degradación lisosomal/proteasomal, NEDD4‑L influye en la homeostasis iónica epitelial y en vías de transducción de señales implicadas en respuestas al estrés celular y en la remodelación tisular. En sistemas murinos, la alteración de la actividad de Nedd4l se ha vinculado con una regulación anómala del manejo de sodio y del control de la presión arterial, y se ha investigado en contextos de fisiología renal, fenotipos cardiovasculares y señalización inflamatoria. NEDD4‑L también interactúa con vías que controlan la polaridad y la diferenciación celular, lo que la hace relevante para estudios de la función de barrera epitelial y de procesos del desarrollo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NEDD4-L (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nedd4l en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nedd4l junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nedd4l tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NEDD4-L.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nedd4l para la investigación de la señalización de NEDD4-L, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nedd4l críticos para la función de NEDD4-L
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nedd4l para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NEDD4-L CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NEDD4-L CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nedd4l. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NEDD4-L (m) y el plásmido HDR NEDD4-L (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nedd4l para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nedd4l definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.