Plásmido CRISPR de Activación (m) Nanog: sc-428155-ACT

Nanog de ratón codifica un factor de transcripción con homeobox que actúa como regulador central de la pluripotencia y la autorrenovación en el embrión preimplantatorio y en las células madre embrionarias. NANOG coopera con OCT4 y SOX2 para establecer el circuito transcripcional central, a la vez que interactúa con vías de remodelación de la cromatina y de control epigenético que gobiernan el compromiso de linaje y la represión de programas de diferenciación. La expresión alterada de NANOG se utiliza ampliamente como marcador de estados celulares tipo madre y está implicada en mecanismos que favorecen la autorrenovación aberrante, la transición epitelio–mesénquima y la resistencia a señales de diferenciación en modelos relevantes para enfermedades. Estas propiedades convierten a Nanog en una diana clave para investigar redes reguladoras génicas del desarrollo, transiciones del destino celular y reprogramación impulsada por factores de transcripción.

Nanog El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nanog sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nanog El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nanog en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nanog, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nanog. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nanog y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nanog en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nanog en células tumorales con expresión de Nanog silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.