Plásmido CRISPR de Activación (h) NAIF1: sc-410516-ACT

NAIF1 (factor 1 inductor de apoptosis nuclear) es una proteína nuclear humana implicada en la regulación de la muerte celular programada y el control de la proliferación. Las funciones descritas relacionan a NAIF1 con procesos asociados a la cromatina y con programas transcripcionales que influyen en la señalización apoptótica, situándola dentro de redes más amplias de respuesta al estrés que modulan las decisiones sobre el destino celular. La expresión alterada de reguladores de la apoptosis como NAIF1 se estudia con frecuencia en el contexto de la biología tumoral, donde los cambios en la supervivencia celular, las respuestas al daño del ADN y el control del crecimiento contribuyen a fenotipos asociados a la enfermedad. Por lo tanto, NAIF1 constituye un nodo útil para analizar mecanismos nucleares que acoplan la regulación génica con la apoptosis y con resultados relacionados con el ciclo celular.

NAIF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NAIF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NAIF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NAIF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NAIF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NAIF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NAIF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NAIF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NAIF1 en células tumorales con expresión de NAIF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.