Plásmido CRISPR de Activación (h) MYL2: sc-402798-ACT

MYL2 codifica la cadena ligera reguladora 2 de la miosina ventricular/cardiaca, un componente del complejo de miosina II sensible al Ca2+ que modula el ciclo de los puentes cruzados actina–miosina y la generación de fuerza contráctil en el músculo estriado. Mediante el control dependiente de la fosforilación de la actividad motora de la miosina, MYL2 contribuye a la organización del sarcómero, a la mecánica de los cardiomiocitos y a las vías de acoplamiento excitación–contracción que coordinan el gasto cardíaco. Las alteraciones en la expresión o la función de MYL2 se han implicado en cardiomiopatías hereditarias y adquiridas, en las que una regulación sarcomérica alterada puede afectar la estructura y el rendimiento del miocardio. Como marcador y regulador de la diferenciación y la contractilidad del músculo cardíaco, MYL2 se utiliza ampliamente en estudios de desarrollo cardíaco, modelado de enfermedades y mecanobiología.

MYL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYL2 en células tumorales con expresión de MYL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.