Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myf-5: sc-400449-ACT

MYF5 code pour le facteur régulateur myogénique Myf-5, un facteur de transcription de type hélice‑boucle‑hélice basique (bHLH) qui agit comme un déterminant précoce de l’engagement dans la lignée du muscle squelettique. Myf-5 coordonne la spécification et la différenciation des myoblastes en régulant des réseaux de gènes myogéniques et en coopérant avec d’autres membres de la famille des MRF pour contrôler la sortie du cycle cellulaire et l’expression des gènes structuraux du muscle. Son activité s’intègre à des signaux du développement, notamment via des voies telles que Wnt et Notch, afin d’orienter les décisions de destinée des progéniteurs et la mise en place du patron musculaire. Une expression dérégulée de MYF5 ou de ses circuits de régulation a été associée à une myogenèse altérée et est fréquemment étudiée dans des contextes tels que les sarcomes et d’autres tumeurs présentant des programmes myogéniques.

Myf-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYF5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myf-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYF5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYF5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myf-5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYF5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myf-5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myf-5 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYF5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.