Plásmido CRISPR de Activación (h) MYEOV2: sc-409378-ACT

COPS9 (también conocido como MYEOV2) codifica un componente asociado al signalosoma COP9, un regulador conservado de las ligasas de ubiquitina tipo cullin-RING que ajusta el recambio proteico mediante la desnedilación y las vías de ubiquitina–proteasoma. A través del control de la degradación dependiente de ubiquitina, los procesos vinculados a COPS9/MYEOV2 influyen en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y programas de transducción de señales, incluidas redes asociadas a MAPK y NF-κB. La desregulación de la actividad del signalosoma COP9 se ha relacionado con proteostasis aberrante y una reprogramación transcripcional observadas en múltiples contextos de cáncer, lo que respalda la investigación de COPS9/MYEOV2 en fenotipos de proliferación y adaptación al estrés. Estas funciones lo convierten en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la regulación mediada por ubiquitina y la intercomunicación entre vías en células humanas.

MYEOV2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COPS9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYEOV2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COPS9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COPS9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYEOV2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COPS9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYEOV2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYEOV2 en células tumorales con expresión de COPS9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.