MSH2 Double Nickase Plasmid (m): sc-421715-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MSH2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MSH2 Double-Nickase-Plasmid (m) und MSH2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Msh2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MSH2: sc-376384
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MSH2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421715-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Msh2* kodiert das MSH2-Protein, eine zentrale Komponente der DNA-Mismatch-Reparatur (MMR), die die Genomstabilität bewahrt, indem sie Basenfehlpaarungen sowie Insertions-/Deletionsschleifen erkennt, die während Replikation und Rekombination entstehen. MSH2 bildet Heterodimere mit MSH6 (MutSα) oder MSH3 (MutSβ), um die Läsionserkennung einzuleiten und nachgeschaltete Reparaturfaktoren zu rekrutieren, die Exzision und Neusynthese koordinieren. Ein Verlust oder eine Abschwächung der MSH2-Funktion erhöht die Mikrosatelliteninstabilität und steigert die spontane Mutationsrate; dadurch werden MMR-Defekte mit hereditärer und sporadischer Tumoranfälligkeit sowie veränderten zellulären Antworten auf bestimmte DNA-schädigende Belastungen in Verbindung gebracht. Entsprechend wird *Msh2* in Mausmodellen von Krankheit und Karzinogenese breit in Signalwegen untersucht, die die Replikationsüberwachung, die Genomerhaltung und Mutationsprozesse steuern.
MSH2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Msh2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Msh2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Msh2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Msh2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.