Plásmido CRISPR de Activación (h) MRP4: sc-401912-ACT

El gen humano **ABCC4** codifica **MRP4** (proteína 4 asociada a resistencia a múltiples fármacos), un transportador de la familia **ABC** (ATP-binding cassette) que media el eflujo dependiente de ATP de aniones orgánicos, incluidos nucleótidos cíclicos (cAMP/cGMP), prostaglandinas, leucotrienos, conjugados de ácidos biliares y diversos metabolitos xenobióticos. Al regular segundos mensajeros intracelulares y mediadores lipídicos, MRP4 influye en la señalización de GPCR, en vías de homeostasis inflamatoria y vascular, y en las respuestas celulares al estrés. La actividad de ABCC4 también modula la farmacocinética y la exposición celular a análogos de nucleósidos y otras moléculas pequeñas mediante una depuración impulsada por el transporte. La expresión desregulada de ABCC4/MRP4 se ha asociado con cambios en la señalización inflamatoria y con fenotipos de respuesta a fármacos vinculados a transportadores en múltiples contextos de enfermedad, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de biología de transportadores y de la interconexión entre vías de señalización.

MRP4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABCC4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MRP4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABCC4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABCC4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MRP4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABCC4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MRP4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MRP4 en células tumorales con expresión de ABCC4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.