MRP-S18B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412012

Panoramica

MRPS18B codifica la proteina ribosomiale mitocondriale S18B (MRP-S18B), un componente della piccola subunità 28S del mitoribosoma dei mammiferi, necessaria per la traduzione delle proteine della fosforilazione ossidativa (OXPHOS) codificate dal genoma mitocondriale. Sostenendo la sintesi di subunità chiave della catena di trasporto degli elettroni, MRP-S18B contribuisce alla capacità respiratoria mitocondriale, alla produzione di ATP e all’omeostasi redox, collegandosi a vie che regolano la proteostasi mitocondriale e la segnalazione integrata dello stress. Alterazioni della traduzione mitocondriale e squilibri dell’OXPHOS sono caratteristiche ricorrenti in patologie che coinvolgono tessuti ad alta richiesta energetica e sono frequentemente osservati nel cancro e nei fenotipi di disfunzione mitocondriale associati alla neurodegenerazione. MRPS18B viene quindi studiato in contesti quali la biogenesi mitocondriale, la riprogrammazione metabolica e il coordinamento nucleo-mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP-S18B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MRPS18B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MRPS18B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MRPS18B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MRP-S18B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MRPS18B per lo studio della segnalazione di MRP-S18B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MRPS18B critici per la funzione di MRP-S18B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MRPS18B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MRP-S18B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MRP-S18B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MRPS18B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MRP-S18B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MRP-S18B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MRPS18B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MRPS18B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.