MRE11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401510-ACT

MRE11 kodiert eine konservierte Nuklease, die den MRE11–RAD50–NBN-(MRN)-Komplex bildet – einen zentralen Sensor und Effektor der Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen. Über Funktionen bei der Prozessierung von DNA-Enden, der ATM/ATR-Checkpoint-Signalgebung, der homologen Rekombination und der Telomer-Erhaltung trägt MRE11 dazu bei, die Genomstabilität unter Replikationsstress und genotoxischer Belastung zu bewahren. Eine veränderte MRN-Funktion wird mit gestörten DNA-Schadensantworten, chromosomaler Instabilität und krebsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, und die MRE11-Aktivität wird in Studien zur Dynamik von Replikationsgabeln und zur chromatinassoziierten Reparatur häufig untersucht. Daher dient MRE11 als zentraler Knotenpunkt, um das Zusammenspiel von DDR-Signalwegen sowie Mechanismen der zellulären Empfindlichkeit gegenüber DNA-schädigenden Einflüssen zu analysieren.

MRE11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MRE11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MRE11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MRE11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MRE11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MRE11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MRE11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MRE11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MRE11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MRE11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.