Plasmide Double Nickase (h) MLKL: sc-401248-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MLKL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MLKL Double Nickase (h) et le plasmide MLKL Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MLKL. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MLKL Antibody (3B2): sc-293201
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MLKL | sc-401248-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MLKL | sc-401248-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La pseudokinase de type « mixed lineage kinase domain-like » (MLKL) est un effecteur terminal de la nécroptose, activé en aval de la signalisation RIPK1/RIPK3 afin d’exécuter une perméabilisation membranaire régulée à la suite de stimuli inflammatoires ou de l’activation des récepteurs de mort. Après phosphorylation par RIPK3, MLKL s’oligomérise et se transloque vers les membranes cellulaires, favorisant un dérèglement ionique et une mort cellulaire lytique qui façonne les réponses immunitaires innées. L’activité de MLKL s’entrecroise avec les voies induites par le TNF, les TLR et les interférons, influençant la libération de cytokines et les lésions tissulaires lors de l’inflammation stérile et des infections. Une signalisation nécroptotique dérégulée impliquant MLKL a été mise en cause dans des modèles de neuroinflammation, de lésions d’ischémie-reperfusion, de pathologies inflammatoires intestinales et d’interactions tumeur–système immunitaire, ce qui en fait un nœud utile pour la dissection des voies de signalisation.
MLKL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MLKL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MLKL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MLKL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MLKL.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.