MLH3 Lentiviral Activation Particles (m): sc-432245-LAC

Mlh3 kodiert für MLH3, ein MutL‑Homolog, das mit MLH1 zusammenwirkt, um die DNA‑Mismatch‑Reparatur und die meiotische Rekombination zu unterstützen und so die Genomstabilität zu erhalten. MLH3 trägt zur reparaturassoziierten Verarbeitung von Rekombinationsintermediaten bei und wurde mit der Bildung von Crossovers während der Meiose in Verbindung gebracht, wodurch es die Chromosomensegregation und fertilitätsbezogene Phänotypen beeinflusst. Über seine Funktionen in der Überwachung von Replikationsfehlern und der Kontrolle der Rekombination ist MLH3 in Signalwege eingebunden, die DNA‑Schadensantworten und den Zellzyklusverlauf steuern. Eine veränderte MLH3‑Aktivität oder ‑Regulation ist daher für Studien zu Mutagenese, chromosomaler Instabilität und Mismatch‑Reparatur‑assoziierten Krankheitsmechanismen in Mausmodellen relevant.

MLH3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Mlh3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MLH3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Mlh3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MLH3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Mlh3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.