Plásmido CRISPR de Activación (h) Miz-1: sc-402110-ACT

ZBTB17 codifica el factor de transcripción Miz-1, una proteína con dedos de zinc BTB/POZ que se une a elementos iniciadores y coordina programas de transcripción dependientes del contexto que controlan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. Miz-1 integra la señalización con la regulación transcripcional mediante interacciones con cofactores como MYC y complejos modificadores de la cromatina, modulando así la expresión de genes como CDKN1A/p21 y otros reguladores asociados a puntos de control. A través de estas redes, Miz-1 influye en el equilibrio entre proliferación y apoptosis y en la expresión génica específica de linaje, lo que convierte a ZBTB17 en un nodo útil para estudiar el control transcripcional en contextos oncogénicos y del desarrollo. La desregulación de circuitos transcripcionales centrados en Miz-1 se ha vinculado con puntos de control del ciclo celular alterados y fenotipos de crecimiento aberrantes relevantes para la biología del cáncer y la regulación hematopoyética.

Miz-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZBTB17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Miz-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZBTB17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZBTB17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Miz-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZBTB17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Miz-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Miz-1 en células tumorales con expresión de ZBTB17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.