Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
mHMGCS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403941
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- mHMGCS El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico mHMGCS, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: mHMGCS Anticuerpo (B-8): sc-393256
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
mHMGCS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403941 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
HMGCS2 codifica la sintasa mitocondrial de 3-hidroxi-3-metilglutaril‑CoA (mHMGCS), la enzima limitante de la cetogénesis que cataliza la formación de HMG‑CoA a partir de acetoacetil‑CoA y acetil‑CoA. Conecta la β‑oxidación hepática de ácidos grasos con la producción de cuerpos cetónicos durante el ayuno y el estrés metabólico, e influye en la homeostasis energética mitocondrial y el equilibrio redox. La actividad de HMGCS2 se integra con programas transcripcionales impulsados por PPARα y con vías de detección de nutrientes que coordinan la utilización de lípidos, el flujo gluconeogénico y el metabolismo oxidativo. La desregulación de HMGCS2 se ha asociado con errores congénitos de la síntesis de cuerpos cetónicos y con fenotipos metabólicos alterados observados en estudios sobre enfermedad hepática y metabolismo del cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO mHMGCS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HMGCS2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HMGCS2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HMGCS2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína mHMGCS.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HMGCS2 para la investigación de la señalización de mHMGCS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de HMGCS2 críticos para la función de mHMGCS
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HMGCS2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido mHMGCS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido mHMGCS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HMGCS2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR mHMGCS (h) y el plásmido HDR mHMGCS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HMGCS2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HMGCS2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.