Plasmide CRISPR d'Activation (h) MFG-E8: sc-402282-ACT

Le gène humain **MFGE8** code la **protéine 8 du facteur EGF du globule gras du lait** (MFG‑E8), une glycoprotéine sécrétée qui se lie à la phosphatidylsérine à la surface des cellules apoptotiques et fait le pont entre celles‑ci et les phagocytes via des intégrines telles que **αvβ3** et **αvβ5**, favorisant l’efferocytose et la résolution de l’inflammation. En régulant l’élimination des cellules apoptotiques, MFG‑E8 influence la signalisation immunitaire innée, le remodelage tissulaire et la polarisation des macrophages, avec des effets en aval sur le profil des cytokines et l’homéostasie de la matrice extracellulaire. L’activité de MFGE8 s’inscrit à l’interface des programmes d’angiogenèse et de réparation des plaies, et elle est souvent étudiée dans des contextes d’inflammation chronique, de fibrose et de biologie du microenvironnement tumoral, où une clairance défectueuse ou une signalisation stromale altérée peuvent contribuer à des phénotypes associés à la maladie.

MFG-E8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MFGE8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MFG-E8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MFGE8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MFGE8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MFG-E8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MFGE8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MFG-E8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MFG-E8 dans les cellules tumorales présentant une expression de MFGE8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.