Metallothionein 4CRISPR激活质粒(h): sc-413667-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Metallothionein 4 CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- Metallothionein 4 CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 Metallothionein 4 CRISPR 激活质粒 (h) 和 Metallothionein 4 CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 MT4 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
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Metallothionein 4CRISPR激活质粒(h) | sc-413667-ACT | 20 µg | $397.00 |
MT4 编码金属硫蛋白 4（Metallothionein 4），这是一种富含半胱氨酸的金属结合蛋白，可通过巯基介导的螯合与隔离作用，参与细胞内锌、铜的缓冲调节，并提供对重金属毒性的保护。作为金属硫蛋白家族成员，金属硫蛋白 4 通过限制金属催化的氧化应激来维持氧化还原稳态，并可影响金属响应性的转录程序，包括由 MTF1 调控的通路。MT4 的表达在分层上皮环境中更为富集，在这些组织中，金属可用性与氧化平衡会共同影响分化过程与屏障完整性。金属硫蛋白信号异常以及金属稳态失衡，常被用于研究上皮细胞应激反应、炎症相关的组织重塑，以及与金属相关的毒理学问题。
Metallothionein 4 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MT4的表达。
Metallothionein 4 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的MT4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于MT4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Metallothionein 4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的MT4位点，并能够研究内源性位点上依赖于Metallothionein 4的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MT4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Metallothionein 4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。