Plasmide CRISPR d'Activation (h) MEK Kinase 1: sc-401107-ACT

Le gène humain MAP3K1 code la MEK kinase 1 (MEKK1), une MAP kinase kinase kinase sérine/thréonine qui intègre des signaux provenant des facteurs de croissance, des cytokines et du stress cellulaire afin de réguler les cascades MAPK en aval. MEKK1 relie les signaux en amont aux voies MKK4/7–JNK et MKK3/6–p38, influençant des programmes transcriptionnels qui contrôlent la prolifération, l’apoptose, la différenciation et les réponses inflammatoires. En raison de ses rôles régulateurs dans les voies de kinases activées par le stress et le remodelage du cytosquelette, MAP3K1 est fréquemment étudié dans des contextes de reconfiguration aberrante des réseaux de signalisation. Des altérations de l’activité de MAP3K1 ont été associées, dans des travaux de recherche mécanistique, à une dérégulation de la sortie de la voie MAPK, pertinente pour l’oncologie, les troubles du développement et des phénotypes de signalisation immunitaire.

MEK Kinase 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP3K1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MEK Kinase 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP3K1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP3K1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MEK Kinase 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP3K1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MEK Kinase 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MEK Kinase 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP3K1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.