Plasmide CRISPR d'Activation (m) megalin/LRP2: sc-420631-ACT

Le gène murin **Lrp2** code la mégaline/LRP2, un grand récepteur endocytique de la famille des récepteurs des LDL, qui assure l’internalisation, dépendante de la clathrine, d’une grande diversité de ligands, notamment des transporteurs de vitamines, des lipoprotéines et des morphogènes. Il est fortement exprimé dans les épithéliums absorbants tels que les tubules proximaux rénaux et contribue à la réabsorption médiée par récepteur, à l’homéostasie des nutriments et à la régulation de la disponibilité extracellulaire des ligands. La mégaline/LRP2 s’insère dans des réseaux de signalisation et de trafic impliqués dans le développement, notamment les voies Sonic hedgehog et liées aux rétinoïdes, en contrôlant l’internalisation des ligands et la capacité de signalisation en aval. Une activité de **Lrp2** dérégulée a été associée à des défauts de transport épithélial et de mise en place des patrons développementaux, ce qui étaye sa pertinence dans des modèles de dysfonction rénale et de troubles du neurodéveloppement.

megalin/LRP2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Lrp2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

megalin/LRP2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Lrp2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Lrp2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de megalin/LRP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Lrp2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de megalin/LRP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie megalin/LRP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Lrp2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.