MCM5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401980

Panoramica

MCM5 codifica una subunità centrale dell’elicasi MCM2–7, che abilita (“licensing”) le origini di replicazione e promuove lo svolgimento del DNA durante la fase S come parte dei complessi di pre-replicazione e CMG (CDC45–MCM–GINS). Coordinando l’attivazione delle origini e la progressione delle forcelle di replicazione, MCM5 contribuisce alla stabilità del genoma e interagisce con la risposta al danno del DNA e con le vie di checkpoint che limitano la sintesi aberrante del DNA. Un’espressione o attività deregolata delle proteine della famiglia MCM è spesso associata a una maggiore capacità proliferativa e a segnature di stress replicativo osservate in molteplici contesti tumorali, a supporto del suo impiego come marcatore meccanicistico negli studi sul ciclo cellulare e sul mantenimento del genoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MCM5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MCM5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MCM5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MCM5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MCM5 per lo studio della segnalazione di MCM5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MCM5 critici per la funzione di MCM5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MCM5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MCM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MCM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MCM5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MCM5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MCM5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MCM5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MCM5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.