Plasmide CRISPR/Cas9 KO MAN2C1 (h): sc-404066

Présentation

MAN2C1 code l’alpha-mannosidase cytosolique 2C1, une enzyme clé du catabolisme des N‑glycanes libres générés lors du renouvellement des glycoprotéines et du contrôle qualité. En éliminant des résidus mannose des oligosaccharides, MAN2C1 soutient le traitement des glycanes à proximité de la voie de dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD) et contribue à la protéostasie cellulaire ainsi qu’au métabolisme des glucides. Des altérations de la prise en charge des N‑glycanes et de l’homéostasie des glycoprotéines ont été associées à une dérégulation de la signalisation et à une adaptation métabolique dans de multiples contextes pathologiques, faisant de MAN2C1 un nœud pertinent pour étudier la régulation de l’état cellulaire dépendante des glycanes. Dans les cellules humaines, la perturbation de MAN2C1 peut servir à analyser comment le traitement cytosolique des glycanes influence les réponses au stress, les interactions fonctionnelles lysosome–réticulum endoplasmique, et les réseaux de signalisation dérivés des glycoprotéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MAN2C1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAN2C1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAN2C1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAN2C1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MAN2C1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAN2C1 pour l'étude de la signalisation de MAN2C1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MAN2C1 essentiels à la fonction de MAN2C1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAN2C1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MAN2C1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MAN2C1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAN2C1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MAN2C1 plasmide HDR (h) et le MAN2C1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAN2C1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAN2C1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.