Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAGE-A1: sc-401056-ACT

Le gène humain **MAGEA1** code **MAGE-A1**, un antigène cancer/testis de la famille des antigènes associés au mélanome (MAGE), dont l’expression est normalement restreinte aux cellules germinales mais qui peut être réexprimé de façon aberrante dans de nombreux contextes tumoraux. MAGE-A1 participe à l’homéostasie protéique et à la régulation transcriptionnelle via des interactions avec des ligases E3 de l’ubiquitine et d’autres partenaires régulateurs, influençant le renouvellement dépendant de l’ubiquitine et des programmes de signalisation en aval. Son expression déréglée est associée à des modifications de la présentation antigénique et des caractéristiques de reconnaissance immunitaire des cellules malignes, et il est largement utilisé comme marqueur moléculaire de l’expression génique associée aux tumeurs. L’étude de MAGE-A1 soutient des investigations mécanistiques sur la dérépression épigénétique, les circuits de réponse au stress et la contribution de la voie ubiquitine–protéasome à des phénotypes pertinents pour la maladie.

MAGE-A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAGEA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAGE-A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAGEA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAGEA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAGE-A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAGEA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAGE-A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAGE-A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAGEA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.