MAF1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-418170-LAC

MAF1 é um represssor transcricional conservado que integra sinais de nutrientes e de estresse à atividade da RNA polimerase III, modulando assim a síntese de tRNAs e de outros pequenos RNAs não codificantes necessários para a capacidade de tradução proteica. Sua atividade é regulada por fosforilação a jusante das vias PI3K–AKT–mTOR e relacionadas, permitindo que as células ajustem a demanda biossintética durante crescimento, privação de nutrientes e respostas ao estresse. Por meio do controle da transcrição pela Pol III e da homeostase translacional, o MAF1 influencia o crescimento celular, a adaptação metabólica e programas de proteostase. A desregulação da atividade da Pol III e das redes de sinalização a montante do mTOR, nas quais o MAF1 participa, é frequentemente estudada em contextos como crescimento oncogênico, biologia de doenças metabólicas e fenótipos associados ao estresse.

As Partículas de Ativação Lentivirais MAF1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de MAF1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MAF1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição MAF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MAF1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo MAF1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.