Plásmido CRISPR de Activación (h) LYPLAL1: sc-414290-ACT

LYPLAL1 codifica la lisofosfolipasa tipo 1, una proteína de la familia de las hidrolasas de serina implicada en reacciones de desacetilación (deacilación) de lípidos y en la homeostasis lipídica celular. Aunque sus sustratos endógenos y el alcance de su actividad catalítica siguen investigándose, LYPLAL1 se ha relacionado con la regulación del manejo de ácidos grasos, la remodelación de lípidos de membrana y redes de señalización metabólica que convergen con vías de balance energético. Estudios genéticos en humanos han asociado loci de LYPLAL1 con rasgos relacionados con la adiposidad y con factores de riesgo cardiometabólico, lo que respalda su relevancia en la investigación de la obesidad, la resistencia a la insulina y la disrregulación lipídica. Estas características convierten a LYPLAL1 en una diana útil para explorar cómo las enzimas que procesan lípidos influyen en fenotipos metabólicos en adipocitos, hepatocitos y otros contextos celulares metabólicos.

LYPLAL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LYPLAL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LYPLAL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LYPLAL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LYPLAL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LYPLAL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LYPLAL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LYPLAL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LYPLAL1 en células tumorales con expresión de LYPLAL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.