Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
LRF/Pokemon Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421462
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- LRF/Pokemon El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico LRF/Pokemon, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LRF/Pokemon Anticuerpo (13E9): sc-33683
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
LRF/Pokemon Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421462 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Zbtb7a codifica LRF/Pokemon, un factor de transcripción con dedos de zinc BTB/POZ que regula el compromiso de linaje, la proliferación y la supervivencia mediante la unión al ADN de manera específica de secuencia y el reclutamiento de complejos correpresores. En contextos hematopoyéticos e inmunitarios, ayuda a coordinar los programas de desarrollo de células B y T, influye en la maduración eritroide y modula redes transcripcionales asociadas a la diferenciación. LRF/Pokemon converge con vías que controlan los puntos de control del ciclo celular y las respuestas al estrés, incluida la antagonización funcional de la señalización supresora tumoral ARF–p53, y puede remodelar estados de cromatina en loci diana. La actividad alterada de Zbtb7a se ha implicado en programas transcripcionales oncogénicos y fenotipos de diferenciación anómalos en modelos de neoplasias hematológicas y tumores sólidos, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos de la tumorigenia y del control del destino celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO LRF/Pokemon (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Zbtb7a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Zbtb7a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Zbtb7a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LRF/Pokemon.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Zbtb7a para la investigación de la señalización de LRF/Pokemon, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Zbtb7a críticos para la función de LRF/Pokemon
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Zbtb7a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Zbtb7a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LRF/Pokemon (m) y el plásmido HDR LRF/Pokemon (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Zbtb7a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Zbtb7a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.