LOXL4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403384-ACT

A LOXL4 humana (lysyl oxidase like 4) é uma amina oxidase dependente de cobre que catalisa a desaminação oxidativa de resíduos de lisina em colágenos e elastina, promovendo a formação de ligações cruzadas covalentes e a maturação da matriz extracelular. Por meio da remodelação da matriz, a LOXL4 influencia a rigidez tecidual, a adesão celular e a migração, integrando-se à sinalização MEC–integrina e a processos mais amplos de reparo de feridas e fibrose. Alterações na expressão de LOXL4 foram relatadas em múltiplos tumores sólidos e em patologias associadas à remodelação, nas quais mudanças na arquitetura do colágeno podem afetar a invasão, a angiogênese e as interações estroma-epitélio. Essas características tornam a LOXL4 um ponto útil para estudar a organização da matriz extracelular e fenótipos dependentes do microambiente em modelos celulares humanos.

LOXL4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LOXL4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LOXL4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LOXL4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LOXL4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LOXL4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LOXL4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LOXL4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LOXL4 em células tumorais com expressão de LOXL4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.