Plásmido CRISPR de Activación (h) LOXL1: sc-401965-ACT

LOXL1 codifica la lisil oxidasa tipo 1 (lysyl oxidase–like 1), una amina oxidasa secretada dependiente de cobre que cataliza la desaminación oxidativa de residuos de lisina en el colágeno y la elastina, lo que permite el entrecruzamiento covalente y la estabilización de la arquitectura de la matriz extracelular. Al regular el ensamblaje de las fibras elásticas y la remodelación de la matriz, LOXL1 influye en la mecánica tisular, la señalización célula–matriz y procesos como la fibrosis y la reparación de heridas. La actividad alterada de LOXL1 se ha asociado con trastornos del tejido conectivo y de la matriz extracelular ocular, incluido el síndrome de exfoliación y el riesgo de glaucoma, y se estudia en el contexto de la integridad del tejido vascular y del suelo pélvico. Como enzima modificadora de la matriz, LOXL1 constituye un nodo útil para investigar la homeostasis de la MEC, la mecanobiología y los fenotipos de enfermedad impulsados por la remodelación en modelos celulares humanos.

LOXL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LOXL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LOXL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LOXL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LOXL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LOXL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LOXL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LOXL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LOXL1 en células tumorales con expresión de LOXL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.