Plásmido CRISPR de Activación (h) LOX: sc-400973-ACT

La LOX (lisil oxidasa) humana codifica una amina oxidasa secretada y dependiente de cobre que cataliza la desaminación oxidativa de residuos de lisina en el colágeno y la elastina, generando aldehídos reactivos que inician el entrecruzamiento covalente y estabilizan la matriz extracelular. Mediante la regulación de la rigidez y la arquitectura de la matriz, LOX influye en la adhesión y migración celular, la mecanotransducción y los programas de remodelación tisular vinculados a la reparación de heridas y la fibrosis. La actividad de LOX se interrelaciona con la señalización sensible a la hipoxia y con vías de organización de la matriz extracelular que moldean las respuestas inflamatorias y estromales. La desregulación de la expresión de LOX se ha asociado con la remodelación patológica de la matriz observada en trastornos fibróticos y en la remodelación del microambiente tumoral, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico en la biología de la matriz extracelular.

LOX El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LOX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LOX El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LOX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LOX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LOX. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LOX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LOX en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LOX en células tumorales con expresión de LOX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.