Plasmide Double Nickase (h) Layilin: sc-408326-NIC

LAYN code pour la layiline, un récepteur transmembranaire de type lectine C, enrichi au niveau des replis membranaires (ruffles) et des sites d’adhérence, où il relie des signaux extracellulaires au cytosquelette d’actine cortical. La layiline s’associe à des microenvironnements riches en hyaluronane et interagit avec des régulateurs du cytosquelette et de la signalisation, influençant le remodelage de la forme cellulaire, la motilité et des voies de signalisation dépendantes de l’adhérence. En tant que composant d’interfaces dynamiques cellule–matrice, LAYN est étudié dans des contextes où les programmes migratoires et les interactions immuno–stromales sont altérés, notamment dans la biologie du microenvironnement tumoral et le remodelage inflammatoire des tissus. Une expression dérégulée de LAYN a été rapportée dans de multiples jeux de données transcriptomiques associés à des maladies, étayant son utilisation comme nœud mécanistique pour explorer des phénotypes d’adhérence et de migration.

Layilin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAYN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAYN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAYN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAYN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.