Laminin γ-2CRISPR激活质粒(h): sc-401068-ACT

LAMC2 编码层粘连蛋白 γ-2，是基底膜中层粘连蛋白-332（laminin-332）的关键亚基，通过整合素介导的信号传导支持上皮细胞的黏附、极性建立与迁移。层粘连蛋白-332 通过结合整合素 α3β1 和 α6β4 等受体，调控黏着斑动力学、半桥粒稳定性，以及包括 FAK/Src、PI3K–AKT 和 MAPK 在内的下游通路。LAMC2 的表达与细胞外基质重塑和创伤再上皮化过程密切相关，在这些过程中它影响角质形成细胞的运动能力与组织完整性。层粘连蛋白 γ-2 的失调与多种疾病背景下的上皮屏障功能改变及侵袭性表型有关，因此是研究 ECM–细胞信号机制的有用靶点。

Laminin γ-2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LAMC2的表达。

Laminin γ-2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的LAMC2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于LAMC2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Laminin γ-2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的LAMC2位点，并能够研究内源性位点上依赖于Laminin γ-2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LAMC2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Laminin γ-2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。