Laminin α-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401801-ACT

LAMA4 codifica a laminina α-4, uma subunidade glicoproteica da matriz extracelular que se organiza nas isoformas laminina-411/421 nas membranas basais. A laminina α-4 sustenta a adesão célula–matriz, a migração e a sobrevivência celular ao interagir com integrinas e recetores relacionados, moldando microambientes vasculares, epiteliais e estromais e influenciando a sinalização a jusante, como as vias FAK/PI3K–AKT e MAPK. Em tecidos humanos, LAMA4 contribui para as propriedades de barreira do endotélio e para a organização do nicho perivascular, e alterações na composição da membrana basal envolvendo redes de laminina têm sido associadas a angiogénese desregulada, inflamação, fibrose e interações tumor–estroma. Estas funções tornam o LAMA4 um alvo útil para estudar a remodelação da matriz extracelular, a mecanotransdução e fenótipos dependentes do microambiente.

Laminin α-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAMA4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Laminin α-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAMA4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAMA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Laminin α-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAMA4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Laminin α-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Laminin α-4 em células tumorais com expressão de LAMA4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.