Laminin α-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401176-ACT

LAMA1 codifica a laminina α-1, uma subunidade principal da laminina-111 e de heterotrímeros de laminina da membrana basal relacionados, que organizam a matriz extracelular e regulam a arquitetura tecidual. Por meio de interações com integrinas, distroglicano e outros receptores da matriz, a laminina α-1 sustenta a adesão, a polaridade, a migração e a sobrevivência celulares e influencia vias de sinalização como adesão focal/FAK, PI3K–AKT e MAPK. LAMA1 é particularmente importante na morfogênese do desenvolvimento e na integridade das membranas basais epiteliais e endoteliais, moldando a comunicação célula–matriz e a mecanotransdução. Redes de laminina desreguladas e expressão alterada de LAMA1 estão implicadas em distúrbios congênitos da membrana basal, fenótipos do neurodesenvolvimento e no remodelamento patológico observado em contextos de câncer e fibrose.

Laminin α-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAMA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Laminin α-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAMA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAMA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Laminin α-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAMA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Laminin α-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Laminin α-1 em células tumorais com expressão de LAMA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.