Plásmido Doble Nickase (h) KV4.2: sc-402801-NIC

KCND2 codifica la subunidad del canal de potasio dependiente de voltaje KV4.2, un mediador principal de las corrientes de K+ tipo A de inactivación rápida, que moldean la repolarización del potencial de acción, la frecuencia de disparo y la excitabilidad dendrítica en células excitables. La función de KV4.2 se regula mediante el ensamblaje del complejo del canal y señales moduladoras, incluidas la fosforilación y las interacciones con proteínas auxiliares que ajustan la compuerta (gating), el tráfico intracelular y la localización en la membrana. Al controlar la excitabilidad y la integración sináptica, KCND2 contribuye a la señalización neuronal dependiente de la actividad y a dinámicas de repolarización relevantes para la electrofisiología cardiaca. La alteración de la expresión de KCND2/KV4.2 o de las propiedades del canal se ha asociado con trastornos de la señalización eléctrica, incluidos fenotipos del neurodesarrollo y relacionados con convulsiones, así como susceptibilidad vinculada a arritmias en estudios centrados en la electrofisiología.

KV4.2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCND2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCND2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCND2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCND2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.