Plasmide CRISPR/Cas9 KO IQGAP3 (h): sc-406335

Présentation

IQGAP3 (IQ motif containing GTPase activating protein 3) est une protéine d’échafaudage qui coordonne la signalisation et la dynamique du cytosquelette en couplant de petites GTPases, des facteurs régulateurs de l’actine et des cascades de kinases. Elle contribue à la progression du cycle cellulaire, à la migration directionnelle et au remodelage de l’adhérence, en intégrant des signaux issus de voies telles que MAPK/ERK et la signalisation des GTPases de la famille Rho afin de façonner les programmes de prolifération et de motilité. Une expression dérégulée d’IQGAP3 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et fait fréquemment l’objet d’études pour son association avec une prolifération accrue, une invasivité renforcée et des caractéristiques épithélio-mésenchymateuses altérées. En tant que gène humain, IQGAP3 est largement utilisé comme nœud pour disséquer, dans des modèles mécanistiques de maladies, le contrôle à l’échelle des réseaux de l’organisation du cytosquelette et de la signalisation mitogène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IQGAP3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IQGAP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IQGAP3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IQGAP3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IQGAP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IQGAP3 pour l'étude de la signalisation de IQGAP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IQGAP3 essentiels à la fonction de IQGAP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IQGAP3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IQGAP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IQGAP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IQGAP3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IQGAP3 plasmide HDR (h) et le IQGAP3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IQGAP3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IQGAP3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.