Plásmido CRISPR de Activación (h) INSR/Insulin Receptor: sc-400075-ACT

INSR codifica el receptor de insulina, una tirosina quinasa transmembrana con actividad de receptor que se une a la insulina para iniciar la autofosforilación y la señalización aguas abajo a través de las vías PI3K–AKT y RAS–MAPK. Estas cascadas coordinan la captación de glucosa, la síntesis de glucógeno, el metabolismo lipídico y un control más amplio del crecimiento y la supervivencia celular, con interacciones cruzadas con mTOR y con programas transcripcionales regulados por FOXO. La actividad de INSR modula la endocitosis del receptor y la dinámica de reciclaje, e influye en la sensibilidad a la insulina a nivel de proteínas adaptadoras como los miembros de la familia IRS. La desregulación de la señalización de INSR se asocia estrechamente con la resistencia a la insulina y con la biología de las enfermedades metabólicas, y también es relevante para la señalización de crecimiento alterada observada en múltiples tejidos y microambientes tumorales.

INSR/Insulin Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de INSR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

INSR/Insulin Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus INSR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional INSR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de INSR/Insulin Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo INSR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de INSR/Insulin Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía INSR/Insulin Receptor en células tumorales con expresión de INSR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.