IL-22Rα1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404104-ACT

IL22RA1 umano codifica per la subunità alfa 1 del recettore dell’IL-22 (IL-22Rα1), una catena recettoriale per citochine di tipo II che si associa a IL10RB per formare il complesso recettoriale funzionale dell’IL-22 nelle cellule epiteliali e nelle cellule della barriera tissutale. Il legame del ligando attiva la segnalazione JAK/STAT, con una marcata fosforilazione di STAT3, e interagisce anche con le vie MAPK e PI3K/AKT per regolare programmi antimicrobici, il ripristino della mucosa e l’espressione di geni infiammatori. La segnalazione mediata da IL-22Rα1 è collegata all’integrità della barriera in cute, polmone e tessuti gastrointestinali ed è spesso studiata in contesti di infiammazione cronica e deregolazione epiteliale. Alterazioni dell’espressione di IL22RA1 o dell’attività della via sono state associate a disturbi infiammatori e alla biologia dei tumori epiteliali, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici delle risposte tissutali guidate dalle citochine.

IL-22Rα1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL22RA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-22Rα1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL22RA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL22RA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-22Rα1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL22RA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-22Rα1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-22Rα1 nelle cellule tumorali con espressione di IL22RA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.