Plásmido Doble Nickase (h) Id4: sc-401380-NIC

ID4 (inhibidor de la unión al ADN 4) codifica una proteína hélice–bucle–hélice que carece de un dominio de unión al ADN y modula la transcripción al secuestrar factores HLH básicos, influyendo así en el compromiso de linaje y en los programas de diferenciación celular. En células humanas, Id4 se vincula con la regulación de la progresión del ciclo celular, procesos del neurodesarrollo y la diferenciación epitelial, integrándose en redes transcripcionales más amplias impulsadas por bHLH. Se ha informado de una expresión alterada de ID4 o de su regulación epigenética en múltiples tipos de tumores, donde se asocia con cambios en proliferación, invasión y fenotipos tipo célula madre, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos. Como regulador dependiente del contexto, ID4 se examina con frecuencia por su impacto en vías del desarrollo y en estados de señalización oncogénica en modelos celulares.

Id4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ID4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ID4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ID4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ID4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.