Partículas Lentivirales de Activación (h) HSP70-1: sc-418088-LAC

HSPA1A codifica la chaperona molecular inducible HSP70-1, un componente central de la respuesta celular al choque térmico que preserva la proteostasis al ayudar al plegamiento de proteínas nacientes, prevenir la agregación y promover el replegamiento o el triaje de proteínas dañadas. HSP70-1 coopera con cochaperonas y con las vías de ubiquitina–proteasoma y de autofagia para regular el control de calidad proteica durante el estrés oxidativo, el estrés proteotóxico y la inflamación. Mediante la modulación de la señalización de estrés, la apoptosis y el procesamiento de antígenos, la actividad de HSPA1A influye en la adaptación celular en contextos como la neurodegeneración, la lesión isquémica y el estrés oncogénico, sin que ello implique un beneficio clínico. Su rápida inducibilidad también la convierte en un indicador útil y un regulador en estudios de gránulos de estrés, del crosstalk con el estrés del RE y de vías de citoprotección.

Las partículas de activación lentiviral HSP70-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HSPA1A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HSP70-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HSPA1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HSP70-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HSPA1A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.