HSP 40 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402810-ACT

DNAJB1 codifica a HSP40 humana (homóloga de DnaJ, subfamília B, membro 1), uma cochaperona citosólica que atua em parceria com a HSP70 para regular o dobramento e o redobramento de proteínas e a triagem de substratos mal dobrados. Ao estimular a atividade ATPase da HSP70, a HSP40 sustenta a proteostase em respostas ao estresse, incluindo choque térmico e estresse oxidativo, e interage com vias que controlam a degradação pelo sistema ubiquitina–proteassoma e a autofagia. A atividade de DNAJB1 influencia as respostas celulares ao estresse proteotóxico, com estudos associando-a à neurodegeneração, à replicação viral e a processos oncogênicos nos quais redes de chaperonas modulam sinalização e estabilidade proteica. A desregulação do equilíbrio entre chaperonas e cochaperonas é frequentemente investigada por seu impacto em proteínas propensas à agregação e em programas transcricionais de adaptação ao estresse.

HSP 40 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DNAJB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSP 40 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DNAJB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DNAJB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSP 40. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DNAJB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSP 40 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSP 40 em células tumorais com expressão de DNAJB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.