Plásmido Doble Nickase (h) Hrs: sc-401501-NIC

El gen humano **HGS** codifica el sustrato de la tirosina cinasa regulado por el factor de crecimiento de hepatocitos (**Hrs**), un componente de **ESCRT-0** que inicia la clasificación endosomal de proteínas de membrana ubiquitinadas. Hrs se une al fosfatidilinositol 3‑fosfato en endosomas tempranos y coordina el reconocimiento de la carga con los complejos ESCRT‑I/II/III para impulsar la formación de cuerpos multivesiculares, la degradación lisosomal y la atenuación de la señalización de receptores. A través de estas funciones, Hrs influye en el control dependiente de la endocitosis de vías como **EGFR** y otras redes de receptores tirosina cinasa, afectando la duración de la señal y la homeostasis celular. La desregulación del tráfico endosomal y del recambio de receptores asociada a una función alterada de HGS/Hrs se ha vinculado a contextos relevantes para la biología del cáncer y los mecanismos de enfermedades neurodegenerativas, por lo que constituye un nodo útil para estudiar la proteostasis y la adaptación de la señalización.

Hrs El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HGS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HGS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HGS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HGS alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.