Plasmide CRISPR/Cas9 KO HR (m): sc-420945
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- HR Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique HR, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HR Antibody (A-11): sc-514686
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO HR (m) | sc-420945 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Hr** code la protéine nucléaire *hairless* (HR), un corépresseur transcriptionnel qui module des programmes d’expression génique en aval des récepteurs nucléaires des hormones, notamment les récepteurs des hormones thyroïdiennes et de l’acide rétinoïque. HR influence la différenciation épidermique et le cycle du follicule pileux en coordonnant, dans la peau et les tissus annexiels, une répression associée à la chromatine. Une altération de la fonction de **Hr** perturbe la morphogenèse folliculaire et l’homéostasie des kératinocytes, ce qui en fait un locus largement utilisé pour étudier les voies régulant la croissance des cheveux et la biologie de la barrière cutanée. **Hr** est donc pertinent pour des modèles expérimentaux de phénotypes de type alopécie et, plus largement, pour l’étude du contrôle transcriptionnel au cours du développement cutané.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HR.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hr pour l'étude de la signalisation de HR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Hr essentiels à la fonction de HR
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hr pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le HR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le HR plasmide HDR (m) et le HR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.