Plasmide Double Nickase (h) Histone Deacetylase 8 (HDAC8): sc-400757-NIC

HDAC8 code l’histone désacétylase 8, une désacétylase de classe I dépendante du Zn2+ qui enlève des groupements acétyle des résidus lysine des histones et d’autres protéines nucléaires afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et la production transcriptionnelle. En régulant la dynamique de l’acétylation, HDAC8 contribue au contrôle épigénétique de la progression du cycle cellulaire, des programmes de différenciation et de l’expression génique en réponse aux dommages de l’ADN. L’activité de HDAC8 s’articule avec le remodelage de la chromatine ainsi qu’avec des réseaux de répression/activation transcriptionnelle qui coordonnent les voies du développement et de réponse au stress. Une expression ou une fonction dérégulée de HDAC8 a été associée à des états épigénétiques altérés observés dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, ce qui en fait une cible de choix pour des études mécanistiques de la régulation génique.

Histone Deacetylase 8 (HDAC8) Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HDAC8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HDAC8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HDAC8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HDAC8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.