Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone Deacetylase 7 (HDAC7): sc-400989-ACT

L’HDAC7 humain code l’histone désacétylase 7, une HDAC de classe IIa qui module l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels en s’associant à des complexes corépresseurs tels que NCoR/SMRT. HDAC7 fait la navette entre le noyau et le cytoplasme en réponse à des signaux dépendants de la phosphorylation, reliant ainsi les voies des kinases à la régulation épigénétique des décisions de destin cellulaire, de la différenciation et des réponses au stress. Dans les contextes immunitaires et vasculaires, HDAC7 a été impliquée dans le contrôle de réseaux géniques influençant la fonction endothéliale et le développement des lymphocytes T, via la régulation de facteurs de transcription et de l’état de la chromatine. Une activité ou une expression d’HDAC7 dérégulée est associée à une altération de la signalisation inflammatoire et à des programmes transcriptionnels oncogéniques, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle épigénétique dans des voies pertinentes pour les maladies.

Histone Deacetylase 7 (HDAC7) Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDAC7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 7 (HDAC7) Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDAC7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDAC7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 7 (HDAC7). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDAC7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 7 (HDAC7) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 7 (HDAC7) dans les cellules tumorales présentant une expression de HDAC7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.