Plásmido Doble Nickase (h) G_{α 11}: sc-401653-NIC

GNA11 codifica la subunidad α Gα11 de la proteína G heterotrimérica humana, un transductor clave de la señalización de receptores acoplados a proteína G (GPCR) asociados a Gq/11 en la membrana plasmática. Tras la activación del receptor, Gα11 estimula la fosfolipasa C-β, aumentando los niveles de IP3 y DAG para promover la movilización intracelular de Ca2+ y la activación de la proteína quinasa C, con efectos posteriores sobre MAPK y otras vías de segundos mensajeros. Este eje de señalización regula la proliferación, la secreción, la dinámica del citoesqueleto y la desensibilización de receptores en diversos tipos celulares. La actividad desregulada de GNA11 se ha vinculado a señalización oncogénica y a alteraciones de la biología endocrina y melanocítica, lo que lo convierte en un nodo relevante para el análisis de vías en modelos pertinentes para enfermedades.

Gα 11 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GNA11 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GNA11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GNA11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GNA11 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.