GSDMDC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406596-ACT

GSDMD (gasdermin D; indicata anche come GSDMDC1) codifica un effettore in grado di formare pori coinvolto nella morte cellulare infiammatoria, che viene attivato tramite clivaggio proteolitico a valle della segnalazione dell’inflammasoma. In seguito al clivaggio mediato dalla caspasi-1 oppure dalle vie caspasi-4/5/11, il frammento N-terminale oligomerizza nelle membrane inducendo la piroptosi e favorendo il rilascio di citochine della famiglia dell’IL-1, collegando il riconoscimento dell’immunità innata alla morte cellulare litica. Questo asse si integra con NLRP3 e con vie dell’inflammasoma correlate, modulando la difesa antimicrobica e l’infiammazione sterile. Un’attività disregolata di GSDMD è stata implicata in stati infiammatori cronici, in modelli di infiammazione associata alla sepsi e nelle interazioni tumore–sistema immunitario, motivando studi meccanicistici sulla morte cellulare e sulla biologia delle citochine in sistemi umani.

GSDMDC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GSDMD senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GSDMDC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GSDMD nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GSDMD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GSDMDC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GSDMD nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GSDMDC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GSDMDC1 nelle cellule tumorali con espressione di GSDMD silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.