Plásmido CRISPR de Activación (h) GPRC5B: sc-409271-ACT

GPRC5B (receptor acoplado a proteína G de clase C, grupo 5, miembro B) es una proteína transmembrana similar a un GPCR huérfano implicada en la modulación de la señalización de receptores en la membrana plasmática y en compartimentos endomembranosos. Se ha vinculado con la regulación de procesos asociados a MAPK/ERK y PI3K–AKT que moldean la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés celular, con efectos dependientes del contexto sobre la señalización inflamatoria y la homeostasis metabólica. Se han descrito cambios en la expresión de GPRC5B en múltiples tipos de tumores y en trastornos con vías inmunitarias o metabólicas desreguladas, lo que respalda su utilidad como un nodo para estudiar la integración de señales. En consecuencia, GPRC5B se examina con frecuencia en modelos de señalización oncogénica, en biología de adipocitos y células inmunitarias, y en el “cross-talk” entre receptores que influye en transiciones del estado celular.

GPRC5B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPRC5B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPRC5B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPRC5B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPRC5B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPRC5B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPRC5B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPRC5B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPRC5B en células tumorales con expresión de GPRC5B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.